Combi-CRISPR: combination of NHEJ and HDR provides efficient and precise plasmid-based knock-ins in mice and rats
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Le résumé fourni par la source
CRISPR-Cas9 are widely used for gene targeting in mice and rats. The non-homologous end-joining (NHEJ) repair pathway, which is dominant in zygotes, efficiently induces insertion or deletion (indel) mutations as gene knockouts at targeted sites, whereas gene knock-ins (KIs) via homology-directed repair (HDR) are difficult to generate. In this study, we used a double-stranded DNA (dsDNA) donor template with Cas9 and two single guide RNAs, one designed to cut the targeted genome sequences and the other to cut both the flanked genomic region and one homology arm of the dsDNA plasmid, which resulted in 20-33% KI efficiency among G0 pups. G0 KI mice carried NHEJ-dependent indel mutations at one targeting site that was designed at the intron region, and HDR-dependent precise KIs of the various donor cassettes spanning from 1 to 5 kbp, such as EGFP, mCherry, Cre, and genes of interest, at the other exon site. These findings indicate that this combinatorial method of NHEJ and HDR mediated by the CRISPR-Cas9 system facilitates the efficient and precise KIs of plasmid DNA cassettes in mice and rats.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Combi-CRISPR: combination of NHEJ and HDR provides efficient and precise plasmid-based knock-ins in mice and rats
- Date Crossref
- 02/07/2020
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Systems Biology Institute pays non établi dans la noticeOrganisation à but non lucratif
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The University of Tokyo Laboratory Animal Research Center pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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The University of Osaka pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Nagoya University Department of Integrative Physiology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Aichi Medical University Division of Laboratory Animal Research pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Fukushima Medical University Department of Molecular Genetics pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Graduate School of Medicine Department of Anatomy and Neurosciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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United Graduate School of Child Development Department of Child Development pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Systems Biology Institute, Laboratory Animal Research Center — The University of Tokyo et The University of Osaka, avec 5 autres affiliations.
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