Integrated Workflow for Chromatin Architecture Analysis in Rare Thymic Cells Using Focused Ion Beam Scanning Electron Microscopy v1
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Le résumé fourni par la source
The thymus, a primary lymphoid organ, plays a critical role in T-cell development and selection including the establishment of central tolerance. To investigate chromatin organisation in cells that regulate thymocyte differentiation, we developed an optimised workflow to quantify heterochromatin-to-euchromatin ratios among different thymic cell types. Traditional electron microscopy (EM) sample preparation methods often require substantial cell quantities, posing challenges for studying rare or low-abundance cells. Our workflow addresses this limitation by enriching cells using fluorescence-activated cell sorting (FACS), followed by chemical fixation and embedding in alginate hydrogel. Samples were then prepared for electron microscopy using a reduced osmium-thiocarbohydrazide-osmium (rOTO) staining protocol, and lead citrate (Walton’s Lead) post-staining provided exceptional chromatin contrast. High-resolution 3D imaging using focused ion beam scanning electron microscopy (FIB-SEM) allowed detailed analysis of nuclear architecture. This approach revealed chromatin remodelling dynamics in thymic cells regulating T-cell development and offered a versatile tool for structural studies of rare cell populations. Graphical Abstract
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Integrated Workflow for Chromatin Architecture Analysis in Rare Thymic Cells Using Focused Ion Beam Scanning Electron Microscopy v1
- Date Crossref
- 29/05/2025
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- posted-content
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Où se fait cette recherche
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and Blood Institute Lung pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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National Cancer Institute pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Carl Zeiss (China) pays non établi dans la noticeEntreprise
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Janelia Research Campus pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Ltd. Carl Zeiss Shanghai) Co. pays non établi dans la noticeEntreprise
Lung — and Blood Institute, National Cancer Institute et Carl Zeiss (China), avec 2 autres affiliations.
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