A New Real-Time Simple Method to Measure the Endogenous Nitrate Reductase Activity (Nar) in Paracoccus denitrificans and Other Denitrifying Bacteria
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Le résumé fourni par la source
The transmembrane nitrate reductase (Nar) is the first enzyme in the dissimilatory alternate anaerobic nitrate respiratory chain in denitrifying bacteria. To date, there has been no real-time method to determine its specific activity embedded in its native membrane; here, we describe such a new method, which is useful with the inside-out membranes of Paracoccus denitrificans and other denitrifying bacteria. This new method takes advantage of the native coupling of the endogenous NADH dehydrogenase or Complex I with the reduction of nitrate by Nar through the quinone pool of the inner membranes of P. denitrificans. This is achieved under previously reached anaerobic conditions. Inner controls confirming the specific Nar activity determined by this new method were made by the total inhibition of the Nar enzyme by sodium azide and cyanide, well-known Nar inhibitors. The estimation of the Michaelis–Menten affinity of Nar for NO3− using this so-called Nar-JJ assay gave a Km of 70.4 μM, similar to previously determined values. This new Nar-JJ assay is a suitable, low-cost, and reproducible method to determine in real-time the endogenous Nar activity not only in P. denitrificans, but in other denitrifying bacteria such as Brucella canis, and potentially in other entero-pathogenic bacteria.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- A New Real-Time Simple Method to Measure the Endogenous Nitrate Reductase Activity (Nar) in Paracoccus denitrificans and Other Denitrifying Bacteria
- Date Crossref
- 10/09/2024
- Éditeur
- MDPI AG
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Universidad Nacional Autónoma de México pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Universidad Politécnica de Pachuca pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Instituto Nacional de Cardiología Departamento de Farmacología pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Departamento de Biología pays non établi dans la noticeInstitution
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Laboratorio de Bioprocesos Ambientales pays non établi dans la noticeInstitution
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Departamento de Microbiología e Inmunología pays non établi dans la noticeInstitution
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Departamento de Bioquímica pays non établi dans la noticeInstitution
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Instituto de Fisiología Celular Departamento de Bioterio pays non établi dans la noticeStructure de recherche
Universidad Nacional Autónoma de México, Universidad Politécnica de Pachuca et Departamento de Farmacología — Instituto Nacional de Cardiología, avec 5 autres affiliations.
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