Validação da sonda para o gene SRY para estudo de quimerismo sexual em transplantados de medula óssea, utilizando a metodologia de FISH automatizado

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Introdução: A determinação do quimerismo sexual pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH) é fundamental para o monitoramento da enxertia. Ela é realizada por repetições curtas em tandem (STR, short tandem repeats), por cariótipo e por hibridação in situ fluorescente (FISH, fluorescence in situ hybridization), que constituem os principais métodos atualmente empregados, sendo a análise de FISH realizada por leitura manual. Diante dos avanços em sondas moleculares e sistemas de análise automatizada, foi proposta a validação do FISH XY com sonda para o gene SRY (que analisa as regiões do centrômero do cromossomo X, o gene SRY e a heterocromatina do cromossomo Y) em 100, 200 e 300 núcleos interfásicos, com leitura automatizada. Objetivo: Estabelecer valores de referência para detecção de quimerismo em pacientes submetidos a TCTH de doadores do sexo oposto, correlacionando os achados com STR e com cariótipo. Método: Foram analisadas 22 amostras de sedimentos (pellets) de medula óssea: 10 de indivíduos controles e 12 de pacientes pós-TCTH, previamente caracterizados quanto ao quimerismo (quimerismo completo, parcial ou perda de quimerismo) por STR e cariótipo. Resultados: A validação considerou critérios como eficiência de hibridação, intensidade de sinal, reprodutibilidade, especificidade e sensibilidade analítica ≥98%. A leitura automatizada demonstrou alta concordância com os métodos convencionais (FISH manual e STR), evidenciando robustez analítica. A leitura de 100 núcleos interfásicos mostrou-se satisfatória para a detecção do quimerismo. Foram definidos parâmetros de leitura, valores de referência para sinais inespecíficos e o critério de positividade baseado na detecção de pelo menos um núcleo com sinal do sexo oposto. Conclusão: A comparação com o padrão manual atualmente utilizado confirmou a acurácia do protocolo. Assim, a metodologia FISH XY automatizada para detecção de quimerismo em interfase foi validada, sendo considerada segura e aplicável na rotina clínica.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.