Improved in vivo gene knockout with high specificity using multiplexed Cas12a sgRNAs
Rattachement africain : de, pl, us, cn. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
CRISPR nuclease-mediated gene knock-out is limited by suboptimal sgRNAs, inaccessible target sites, and undesired repair outcomes. Here, we present a Cas12a-based system in Drosophila that targets each gene with four sgRNAs to overcome these limitations. Multiplexed sgRNAs act through redundancy and synergism, frequently creating deletions between target sites and increasing the fraction of loss-of-function mutations. We show that multiplexed gene targeting is well tolerated and does not cause widespread proximity effects. To visualize CRISPR-nuclease activity in living animals, we developed a screening assay and used it to assess Cas12a activity across 33% of the Drosophila genome in combination with over 2000 sgRNAs. This revealed remarkably high on-target (>99%) and very low (<1%) off-target activity of multiplexed Cas12a sgRNA arrays. Quantitative side-by-side comparisons with current Cas9-based systems targeting over 100 genes in parallel demonstrate that multiplexed Cas12a gene targeting achieves superior performance and reveals phenotypes missed by established methods. The system described here provides a framework for reliable gene knock-out in multicellular systems.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Improved in vivo gene knockout with high specificity using multiplexed Cas12a sgRNAs
- Date Crossref
- 15/01/2026
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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German Cancer Research Center Division of Signaling and Functional Genomics pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Heidelberg University Department of Cell and Molecular Biology & BioQuant pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University Hospital Heidelberg pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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DKFZ-ZMBH Alliance pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institute of Human Genetics pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Central South University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Xiangya Hospital Central South University pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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TH Bingen University of Applied Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Medical Faculty Heidelberg Institute for Human Genetics pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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The Affiliated XiangTan Central Hospital of Hunan University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Applied Sciences Bingen Department of Life Sciences and Engineering pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Division of Signaling and Functional Genomics — German Cancer Research Center, Department of Cell and Molecular Biology & BioQuant — Heidelberg University et University Hospital Heidelberg, avec 8 autres affiliations.
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