BRET-based G Protein Biosensors for Measuring G Protein-Coupled Receptor Activity in Live Cells
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Le résumé fourni par la source
G protein-coupled receptors (GPCRs) constitute the largest family of transmembrane receptors, playing a crucial role in cellular signaling by transducing extracellular stimuli into intracellular responses. GPCR activation leads to conformational changes that enable interactions with heterotrimeric G proteins. Upon activation, the Gα subunit undergoes GDP-GTP exchange, dissociating from the Gβγ dimer and triggering downstream signaling cascades. To study GPCR-mediated G protein activation, bioluminescence resonance energy transfer (BRET)-based biosensors is a highly sensitive and non-invasive approach. The G protein-based tricistronic activity sensors (G-CASE biosensors), developed by Schihada et al., detect heterotrimer dissociation as a proxy for activation and enable the real-time monitoring of GPCR activity using a single plasmid transfection, overcoming the limitations of co-transfection approaches. BRET assays offer several advantages over fluorescence-based techniques, such as lower background noise, reduced photobleaching, and improved sensitivity. In this protocol, the BRET-based G-CASE biosensors were used in live-cells and 96-well plates. Specifically, we assess the activity of the β2-adrenergic receptor (β2-AR) and the cannabinoid type 1 receptor (CB1R) in terms of G protein activation. Using HEK 293T wild-type cells transiently transfected with β2-AR and HEK293T cells stably expressing CB1R, the robustness of Gs and Gi3 G-CASE biosensors is confirmed. This protocol supports the utility of this approach for pharmacological studies and high-throughput GPCR screening to better understand the ability of ligands to activate specific pathways, for example, via a biased signaling and thus, facilitating the discovery of novel therapeutic compounds.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- BRET-based G Protein Biosensors for Measuring G Protein-Coupled Receptor Activity in Live Cells
- Date Crossref
- 07/11/2025
- Éditeur
- MyJove Corporation
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Centre National de la Recherche Scientifique pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Université de Bordeaux pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Chimie et Biologie des Membranes et des Nanoobjects pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institut Polytechnique de Bordeaux pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Philipps University of Marburg pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Bordeaux CNRS pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Philipps-University Marburg Department of Pharmaceutical Chemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Centre National de la Recherche Scientifique, Université de Bordeaux et Chimie et Biologie des Membranes et des Nanoobjects, avec 4 autres affiliations.
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