In-Cell Mass Spectrometry and Ultraviolet Photodissociation Navigates the Intracellular Protein Heterogeneity
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Directly probing the heterogeneous conformations of intracellular proteins within their native cellular environment remains a significant challenge in mass spectrometry (MS). Here, we establish an in-cell MS and ultraviolet photodissociation (UVPD) strategy that directly ejects proteins from living cells into a mass spectrometer, followed by 193 nm UVPD for structural analysis. Applying this approach to calmodulin (CaM), we reveal that it adopts more extended conformations within living cells compared with purified samples in vitro, highlighting the unique influence of intracellular environments on protein folding. Furthermore, UVPD analysis of calcium ion (Ca 2+ )-binding variants of CaM unveils not only the conformational heterogeneity induced by multiple Ca 2+ modulations but also reveals distinct preferences of Ca 2+ binding sites across different conformations. This strategy provides a powerful tool for interrogating the structure–function relationships of intracellular protein variants with sophisticated metal ion binding, paving the way for a deeper understanding of protein conformations within their native cellular context.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- In-Cell Mass Spectrometry and Ultraviolet Photodissociation Navigates the Intracellular Protein Heterogeneity
- Date Crossref
- 30/01/2025
- Éditeur
- American Chemical Society (ACS)
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Dalian Institute of Chemical Physics pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Chinese Academy of Sciences pays non établi dans la noticeOrganisme public
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University of Chinese Academy of Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Science and Technology of China Hefei National Research Center for Physical Sciences at the Microscale pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Hefei National Center for Physical Sciences at Nanoscale pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Zhejiang University Department of Chemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Anhui Agricultural University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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State Key Laboratory of Molecular Reaction Dynamics pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Hefei National Research Center for Physical Sciences at the Microscale pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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School of Chemistry and Materials Science pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Department of Chemistry pays non établi dans la noticeInstitution
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School of Life Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences et University of Chinese Academy of Sciences, avec 9 autres affiliations.
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