Super‐Resolved Protein Imaging Using Bifunctional Light‐Up Aptamers
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Le résumé fourni par la source
Efficient labeling methods for protein visualization with minimal tag size and appropriate photophysical properties are required for single-molecule localization microscopy (SMLM), providing insights into the organization and interactions of biomolecules in cells at the molecular level. Among the fluorescent light-up aptamers (FLAPs) originally developed for RNA imaging, RhoBAST stands out due to its remarkable brightness, photostability, fluorogenicity, and rapid exchange kinetics, enabling super-resolved imaging with high localization precision. Here, we expand the applicability of RhoBAST to protein imaging by fusing it to protein-binding aptamers. The versatility of such bifunctional aptamers is demonstrated by employing a variety of protein-binding aptamers and different FLAPs. Moreover, fusing RhoBAST with the GFP-binding aptamer AP3 facilitates high- and super-resolution imaging of GFP-tagged proteins, which is particularly valuable in view of the widespread availability of plasmids and stable cell lines expressing proteins fused to GFP. The bifunctional aptamers compare favorably with standard antibody-based immunofluorescence protocols, as they are 7-fold smaller than antibody conjugates and exhibit higher bleaching-resistance. We demonstrate the effectiveness of our approach in super-resolution microscopy in secondary mammalian cell lines and primary neurons by RhoBAST-PAINT, an SMLM protein imaging technique that leverages the transient binding of the fluorogenic rhodamine dye SpyRho to RhoBAST.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Super‐Resolved Protein Imaging Using Bifunctional Light‐Up Aptamers
- Date Crossref
- 09/12/2024
- Éditeur
- Wiley
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Heidelberg University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University Hospital Heidelberg pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Karlsruhe Institute of Technology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Eindhoven University of Technology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Max Planck Institute for Medical Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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University of Illinois Urbana-Champaign pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Universität Heidelberg Institute of Pharmacy and Molecular Biotechnology GERMANY Universitat Heidelberg pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Universität Heidelberg Department of Functional Neuroanatomy GERMANY pays non établi dans la noticeInstitution
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Department of Physics University of Illinois at Urbana-Champaign Urbana IL 61801 USA pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Heidelberg University, University Hospital Heidelberg et Karlsruhe Institute of Technology, avec 6 autres affiliations.
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