Eukaryotic-driven directed evolution of Cas9 nucleases
Rattachement africain : it, fr. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
BACKGROUND: Further advancement of genome editing highly depends on the development of tools with higher compatibility with eukaryotes. A multitude of described Cas9s have great potential but require optimization for genome editing purposes. Among these, the Cas9 from Campylobacter jejuni, CjCas9, has a favorable small size, facilitating delivery in mammalian cells. Nonetheless, its full exploitation is limited by its poor editing activity. RESULTS: Here, we develop a Eukaryotic Platform to Improve Cas Activity (EPICA) to steer weakly active Cas9 nucleases into highly active enzymes by directed evolution. The EPICA platform is obtained by coupling Cas nuclease activity with yeast auxotrophic selection followed by mammalian cell selection through a sensitive reporter system. EPICA is validated with CjCas9, generating an enhanced variant, UltraCjCas9, following directed evolution rounds. UltraCjCas9 is up to 12-fold more active in mammalian endogenous genomic loci, while preserving high genome-wide specificity. CONCLUSIONS: We report a eukaryotic pipeline allowing enhancement of Cas9 systems, setting the ground to unlock the multitude of RNA-guided nucleases existing in nature.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Eukaryotic-driven directed evolution of Cas9 nucleases
- Date Crossref
- 25/03/2024
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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University of Trento Laboratory of Molecular Virology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Inserm pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Institut des Maladies Génétiques Imagine pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Université de Paris Present address: Laboratory of Chromatin and Gene Regulation During Development pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Alia Therapeutics S.R.L pays non établi dans la noticeInstitution
Laboratory of Molecular Virology — University of Trento, Inserm et Institut des Maladies Génétiques Imagine, avec 2 autres affiliations.
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