Toward the quantification of α-synuclein aggregates with digital seed amplification assays
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Le résumé fourni par la source
The quantification and characterization of aggregated α-synuclein in clinical samples offer immense potential toward diagnosing, treating, and better understanding neurodegenerative synucleinopathies. Here, we developed digital seed amplification assays to detect single α-synuclein aggregates by partitioning the reaction into microcompartments. Using pre-formed α-synuclein fibrils as reaction seeds, we measured aggregate concentrations as low as 4 pg/mL. To improve our sensitivity, we captured aggregates on antibody-coated magnetic beads before running the amplification reaction. By first characterizing the pre-formed fibrils with transmission electron microscopy and size exclusion chromatography, we determined the specific aggregates targeted by each assay platform. Using brain tissue and cerebrospinal fluid samples collected from patients with Parkinson's Disease and multiple system atrophy, we demonstrated that the assay can detect endogenous pathological α-synuclein aggregates. Furthermore, as another application for these assays, we studied the inhibition of α-synuclein aggregation in the presence of small-molecule inhibitors and used a custom image analysis pipeline to quantify changes in aggregate growth and filament morphology.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Toward the quantification of α-synuclein aggregates with digital seed amplification assays
- Date Crossref
- 09/01/2024
- Éditeur
- National Academy of Sciences
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Brigham and Women's Hospital Department of Pathology pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Harvard University Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Massachusetts Institute of Technology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Massachusetts General Hospital Physician Scientist Training Program pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Broad Institute pays non établi dans la noticeOrganisation à but non lucratif
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Harvard Stem Cell Institute pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Harvard Medical School pays non établi dans la noticeInstitution
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John A. Paulson School of Engineering & pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Department of Medical Sciences pays non établi dans la noticeInstitution
Department of Pathology — Brigham and Women's Hospital, Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering — Harvard University et Massachusetts Institute of Technology, avec 6 autres affiliations.
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