Isolation of full-length IgG antibodies from combinatorial libraries expressed in the cytoplasm of Escherichia coli
Rattachement africain : us. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
Here we describe a facile and robust genetic selection for isolating full-length IgG antibodies from combinatorial libraries expressed in the cytoplasm of redox-engineered Escherichia coli cells. The method is based on the transport of a bifunctional substrate comprised of an antigen fused to chloramphenicol acetyltransferase, which allows positive selection of bacterial cells co-expressing cytoplasmic IgGs called cyclonals that specifically capture the chimeric antigen and sequester the antibiotic resistance marker in the cytoplasm. The utility of this approach is first demonstrated by isolating affinity-matured cyclonal variants that specifically bind their cognate antigen, the leucine zipper domain of a yeast transcriptional activator, with subnanomolar affinities, which represent a ~20-fold improvement over the parental IgG. We then use the genetic assay to discover antigen-specific cyclonals from a naïve human antibody repertoire, leading to the identification of lead IgG candidates with affinity and specificity for an influenza hemagglutinin-derived peptide antigen.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Isolation of full-length IgG antibodies from combinatorial libraries expressed in the cytoplasm of Escherichia coli
- Date Crossref
- 14/06/2023
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Cornell University Cornell Institute of Biotechnology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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New England Biolabs (United States) pays non établi dans la noticeEntreprise
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Robert F. Smith School of Chemical and Biomolecular Engineering pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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College of Veterinary Medicine Biomedical and Biological Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Cornell Institute of Biotechnology — Cornell University, New England Biolabs (United States) et Robert F. Smith School of Chemical and Biomolecular Engineering, avec 1 autre affiliation.
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