Estudo da resposta imune inata celular in vitro contra Dengue virus e Zika virus

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Dengue virus (DENV) e Zika virus (ZIKV) pertencem ao gênero Flavivirus da família Flaviviridae. São arbovirus transmitidos por mosquitos do gênero Aedes, porém, outros modos de transmissão vêm sendo relatados para ZIKV, como a transmissão vertical e sexual. DENV possui quatro sorotipos distintos (DENV 1 - 4), cada um com vários genótipos e todos são capazes de causar a dengue não grave, com e sem sinais de alarme, e a dengue grave. O ZIKV possui duas linhagens, a asiática e a africana. Já foi comprovado que a infecção tanto por DENV como por ZIKV podem causar complicações neurológicas graves. E, recentemente, ZIKV vem sendo relacionado com microcefalia e Síndrome de Guillain-Barre. Como somos um país endêmico para Flavivirus, o primeiro passo do trabalho foi comprovar que as amostras de ZIKV recebidas por nossa instituição eram realmente este vírus, e não havia coinfecção com DENV. Para isto, foi feita PCR em tempo real com iniciadores específicos para ZIKV e DENV e também nested PCR com iniciadores para DENV, demonstrando que o ZIKV foi positivo na PCR em tempo real e foi negativo para DENV pelo nested PCR. O objetivo principal desta dissertação foi comparar a resposta imune celular desencadeada por dois isolados distintos de DENV 3, um neurotrópico (genótipo I) e outro não neurotrópico (genótipo III). E também comparar a resposta imune desencadeada por dois isolados brasileiros de ZIKV (PE243 e SPH). O estudo a resposta imune desencadeada pelos vírus foi feito através da quantificação da produção de óxido nítrico e de diferentes citocinas, avaliando a susceptibilidade à infecção e multiplicação viral das diferentes células utilizadas neste trabalho e avaliando a ativação de TLR2 e/ou TLR4. Assim, macrófagos intraperitoneais de camundongos C57BL/6, células KG-1 e THP-1 foram infectadas com DENV e ZIKV, e os sobrenadantes destas células foram coletados em diferentes dias após a infecção. Os sobrenadantes foram analisados por reação de Griess, para a quantificação do óxido nítrico produzido pelas células e por CBA para a quantificação das citocinas. Também foi avaliado se estas células foram susceptíveis à infecção dos vírus, por titulação. Nas células KG-1, foi detectado DENV 3 genótipo I até o 10° d.p.i. e ZIKV até o 5º d.p.i., com títulos mais altos em comparação com os macrófagos murinos. Não foi detectado DENV 3 genótipo III nas células KG-1. Como só foram detectados virus nos 1º e 2º d.p.i. nos macrófagos intraperitoneais de camundongo, é possível sugerir que os vírus foram inibidos pela capacidade destas células de produzir uma resposta imune inata eficaz contra a infecção por DENV e por ZIKV. Foi demonstrado que o NO e o IFNγ são importantes no controle da infecção por DENV 3. E que as citocinas TNF, IL-6 e a quimiocina MCP-1 estão relacionadas à infecção pelo sorotipo neurovirulento. E ainda, a ativação de TLR2 também é maior quando as células são infectadas pelo genótipo neurovirulento. Portanto, a resposta imune desencadeada pelo genótipo neurovirulento foi diferente em comparação com a resposta imune desencadeada pelo genótipo não neurovirulento. Também foi demonstrado que os dois isolados de ZIKV utilizados desencadeiam respostas imunes completamente diferentes, sendo que a amostra ZIKV PE243 desencadeou uma resposta imune mais forte, com produção de NO, maior produção das citocinas e ativação de TLR2 enquanto que a resposta imune desencadeada por ZIKV SPH foi mais branda, sem produção de NO, com menor produção de citocinas e sem a ativação de TLR2.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.