CRISPR/Cas9-mediated knockout of p22phox leads to loss of Nox1 and Nox4, but not Nox5 activity
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Le résumé fourni par la source
The NADPH oxidases are important transmembrane proteins producing reactive oxygen species (ROS). Within the Nox family, different modes of activation can be discriminated. Nox1-3 are dependent on different cytosolic subunits, Nox4 seems to be constitutively active and Nox5 is directly activated by calcium. With the exception of Nox5, all Nox family members are thought to depend on the small transmembrane protein p22phox. With the discovery of the CRISPR/Cas9-system, a tool to alter genomic DNA sequences has become available. So far, this method has not been widely used in the redox community. On such basis, we decided to study the requirement of p22phox in the Nox complex using CRISPR/Cas9-mediated knockout. Knockout of the gene of p22phox, CYBA, led to an ablation of activity of Nox4 and Nox1 but not of Nox5. Production of hydrogen peroxide or superoxide after knockout could be rescued with either human or rat p22phox, but not with the DUOX-maturation factors DUOXA1/A2. Furthermore, different mutations of p22phox were studied regarding the influence on Nox4-dependent H2O2 production. P22phox Q130* and Y121H affected maturation and activity of Nox4. Hence, Nox5-dependent O2•− production is independent of p22phox, but native p22phox is needed for maturation of Nox4 and production of H2O2.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- CRISPR/Cas9-mediated knockout of p22phox leads to loss of Nox1 and Nox4, but not Nox5 activity
- Date Crossref
- 01/10/2016
- Éditeur
- Elsevier BV
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Goethe University Frankfurt pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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German Centre for Cardiovascular Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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King's College London pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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British Heart Foundation pays non établi dans la noticeOrganisation à but non lucratif
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German Center for Lung Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Cardio-Pulmonary Institute pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institut für Kardiovaskuläre Physiologie pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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German Center for Cardiovascular Research (DZHK) pays non établi dans la noticeInstitution
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Justus-Liebig-University Member of the German Center for Lung Research (DZL) pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Goethe University Frankfurt, German Centre for Cardiovascular Research et King's College London, avec 6 autres affiliations.
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