Hydrogen-exchange behavior of the L20A mutant of the protein A B domain in guanidinium chloride: evidence for persistent native-like contacts
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Le résumé fourni par la source
Residual structure in unfolded proteins plays a crucial role in directing folding pathways. Here, we examined the unfolded state of the B domain of staphylococcal protein A carrying the L20A mutation, which disrupts native hydrophobic contacts between Leu20 and helix H3 (residues 41-56). The L20A mutant markedly reduced the thermodynamic stability of the native state. Using dimethylsulfoxide (DMSO)-quenched hydrogen/deuterium (H/D)-exchange NMR spectroscopy, we measured H/D-exchange kinetics for backbone amide protons in 6 M guanidinium chloride. At defined exchange times, the reaction mixture was rapidly transferred to a DMSO solution using a spin desalting column, thereby quenching exchange and allowing accurate NMR measurements. Even under the strongly denaturing condition of 6 M guanidinium chloride, the L20A mutant exhibited substantially lower protection against H/D exchange than the wild-type protein, particularly for residues in helix H3. These results indicate that native-like tertiary contacts between Leu20 and helix H3 persist in the unfolded ensemble and contribute to stabilizing residual structure. Our findings demonstrate that DMSO-quenched H/D-exchange NMR combined with targeted mutation provides a powerful approach for dissecting residual interactions and elucidating how early native-like contacts shape folding pathways.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Hydrogen-exchange behavior of the L20A mutant of the protein A B domain in guanidinium chloride: evidence for persistent native-like contacts
- Date Crossref
- 08/06/2026
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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National Institutes of Natural Sciences Okazaki Collaborative Platform pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institute for Molecular Science pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Tokyo Institute of Technology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Okazaki National Research Institutes pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Nagoya City University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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The Graduate University for Advanced Studies pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Nagoya University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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The University of Tokyo pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Exploratory Research Center on Life and Living Systems pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Materials and Structures Laboratory at Institute of Integrated Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Graduate School of Pharmaceutical Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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School of Science Department of Physics pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Okazaki Collaborative Platform — National Institutes of Natural Sciences, Institute for Molecular Science et Tokyo Institute of Technology, avec 9 autres affiliations.
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