EFEITOS DA DEFICIENCIA DE PKD1 SOBRE A RESPOSTA AO ESTRESSE DO RETICULO ENDOPLASMATICO INDUZIDO POR TUNICAMICINA

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Introdução: A maioria dos casos de doença renal policística autossômica dominante é causada por uma variante germinativa em PKD1, o gene que codifica a proteína policistina-1 (PC1). Deficiência de Pkd1 foi previamente associada ao aumento de suscetibilidade à isquemia/reperfusão renal. Níveis funcionais adequados de PC1 dependem de seu processamento apropriado no retículo endoplasmático (RE). Em resposta a uma agressão celular, diferentes vias são ativadas para proteger a célula durante um estresse transitório ou para induzir apoptose em casos de estresse persistente. Estudos anteriores investigaram como a modulação do estresse de RE (ERE) pode influenciar a progressão da doença cística, mas não os efeitos potenciais da deficiência de Pkd1 sobre a resposta à indução de ERE. Métodos: Utilizamos um modelo in vitro composto por células epiteliais tubulares renais Pkd1+/+, Pkd1+/- e Pkd1-/- para avaliar essa relação. As células foram expostas ao indutor de ERE tunicamicina (TUN) a 1 µg/mL e a expressão de proteínas do RE foi analisada por western blot. Resultados: As células Pkd1+/- apresentaram maior expressão basal de GRP78 que as células Pkd1+/+, enquanto as células Pkd1-/- exibiram um perfil intermediário [Pkd1+/+: 1,00±0,16 vs Pkd1+/-: 1,62±0,32 vs Pkd1-/-: 1,29±0,24 fold change (FC); n=4; P=0,02]. Por outro lado, as células Pkd1+/+ mostraram ativação numericamente mais intensa da via IRE1α/XBP1s em resposta à TUN [expressão de XBP1s; exposição por 6 h – Pkd1+/+: controle 0,86 (0,69–1,03) vs TUN 2,99 (2,42–3,54) FC; Pkd1+/-: controle 1,25±0,09 vs TUN 1,77±0,44 FC; Pkd1-/-: 0,75±0,12 vs TUN 1,45±0,22 FC; n=4; comparações estatisticamente significativas]. As células Pkd1-/-, por sua vez, apresentaram elevação numericamente maior de CHOP após o tratamento com TUN em comparação com as demais linhagens celulares (exposição por 6 h, Pkd1+/+: controle 1,14±0,08 vs TUN 1,76±0,15 FC; Pkd1+/-: controle 0,87±0,14 vs TUN 2,23±0,16 FC; Pkd1-/-: controle 1,08±0,11 vs TUN 2,61±0,39 FC; n=4; comparações estatisticamente significativas). TUN não induziu alterações significativas nos níveis de caspase-3 clivada nas três linhagens celulares. Discussão e Conclusões: Nossos dados sugerem que a deficiência de Pkd1 possa comprometer a resposta adaptativa ao ERE induzido por TUN, favorecendo a morte celular e afetando, portanto, a resposta ao estresse do RE. Nossos achados também podem ter proporcionado informações importantes sobre o mecanismo de proteção mediado por PC1 frente a insultos renais.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.