Selection and optimization strategy for Rap1-targeting single-domain antibodies as platelet activation markers
Rattachement africain : fr. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
Background: Rap1 is critical for platelet activation, functioning as a key node of the platelet activation pathways. Objectives: This study aimed to develop VHH-Fc (minibodies) against Rap1 for the purpose to quantify active Rap1 levels in platelets. Methods: We have produced the first generation of VHHs against active Rap1 through a series of negative and positive screenings of a synthetic phage display library, utilizing both inactive and active Rap1B. We performed random mutagenesis, followed by yeast 2-hybrid screening to optimize variants. Results: of 4.4 nM and showed enhanced capacity to capture active GTP-bound Rap1 compared with the original VHH-Fc. Additionally, it was able to detect overexpressed active Rap1B G12V in HeLa cells. An ELISA setup combining VHH-Fc B14 and a commercial monoclonal antibody targeting total Rap1 was highly effective in detecting both GTPγS-bound Rap1 and endogenous active Rap1 in platelets. Conclusion: This study identifies, that accurately capture active Rap1 in platelets, thereby establishing them as promising tools for future research. We also developed a reliable ELISA test that can facilitate clinical studies to monitor platelet Rap1 activation in various medical contexts.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Selection and optimization strategy for Rap1-targeting single-domain antibodies as platelet activation markers
- Date Crossref
- 01/01/2026
- Éditeur
- Elsevier BV
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Inserm pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Aix-Marseille Université pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Institut National de Recherche pour l'Agriculture pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Centre National de la Recherche Scientifique pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Aix Marseille University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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BioCytex pays non établi dans la noticeInstitution
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