RNA‐Lebendzellmikroskopie via click‐funktionalisierter Tri PPP ro Nucleotid‐Reporter

Le résumé fourni par la source

Abstrakt Das Verständnis der RNA‐Synthese und ‐Dynamik in Zellen setzt die Entwicklung effizienter Markierungsstrategien voraus, die sowohl mit der zellulären Umgebung kompatibel sind, als auch in lebenden Zellen angewendet werden können. Wir haben eine zuverlässige, bioorthogonale Strategie zur Markierung von RNA in lebenden Zellen unter Verwendung des Tri PPP ro‐(Triphosphat‐Pronucleotid)‐Konzepts entwickelt. Dies ermöglicht die zelluläre Aufnahme von Nucleosidtriphosphaten, die mit sterisch anspruchsvollen funktionellen Gruppen wie trans ‐Cycloocten (2TCO a ) und Bicyclo[6.1.0]nonin (BCN) modifiziert sind und eine selektive Reaktivität in Diels‐Alder‐Reaktionen mit inversem Elektronenbedarf (IEDDA) aufweisen. Nach der intrazellulären Hydrolyse der Tri PPP ro‐modifizierten Uridine und Cytidine erfolgt deren metabolische Inkorporation in neu synthetisierte RNA durch endogene RNA‐Polymerasen. Die anschließende IEDDA‐Reaktion mit einem zweifach‐fluorogenen Tetrazin‐Cyanin‐Styryl‐Farbstoffkonjugat ermöglicht eine waschfreie und kontrastreiche Visualisierung der RNA‐Synthese in Zellen. Wir demonstrieren eine effiziente RNA‐Markierung, die durch Lokalisierung in Nucleoli und Spezifität für neu transkribierte RNA gekennzeichnet ist, sowie durch Transkriptionshemmung und Kolokalisierung mit ribosomaler RNA validiert wurde. Direkte Vergleiche mit herkömmlichen Transporter‐basierten Systemen zeigen, dass die Tri PPP ro‐Strategie in Bezug auf Markierungseffizienz sowie Zellkompatibilität überlegen ist. Der Tri PPP ro‐Ansatz stellt eine nicht‐genetische, modulare und hochspezifische Methode zur Echtzeit‐Visualisierung von RNA dar und ermöglicht eine breite Anwendbarkeit in der RNA‐Biologie sowie der antiviralen Forschung.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.