Enabling Fluorescence Lifetime Imaging Multiplexing Using UnaG through Its Modification with Canonical and Noncanonical Amino Acids
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Le résumé fourni par la source
Fluorogen-activating proteins are powerful molecular tools for microscopy, including functional imaging. These proteins serve as an alternative to GFP-like proteins, as they do not require oxygen for chromophore maturation. However, the restricted selectivity of proteins to chromophores, combined with the limited number of spectral channels of conventional fluorescent microscopes, hinders the development of multicolor synthetic dyes. Additionally, the poor cell and tissue permeability of synthetic chromophores further limits their utility. In this work, we address these challenges by combining time-resolved methods with the rational design of the UnaG protein, which utilizes bilirubin as a natural chromophore. To turn UnaG into a palette of probes for fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM), we solved two practical problems: first, we determined the limits of bilirubin lifetime variations in response to changes in the protein structure and, second, we determined what minimal structural changes can be reliably distinguished by lifetime analysis in cellula . Combining classical point mutagenesis and the translational introduction of noncanonical amino acids, we generated UnaG with fluorescence lifetimes ranging from hundreds of picoseconds to nanoseconds. We explored the potential for further modification of the UnaG protein matrix to optimize spectral and temporal characteristics of bilirubin fluorescence and its quantitative detection through time-resolved approaches.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Enabling Fluorescence Lifetime Imaging Multiplexing Using UnaG through Its Modification with Canonical and Noncanonical Amino Acids
- Date Crossref
- 04/09/2025
- Éditeur
- American Chemical Society (ACS)
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Lomonosov Moscow State University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Faculty (United Kingdom) pays non établi dans la noticeEntreprise
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Institute of Bioorganic Chemistry pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Izmir Institute of Technology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Institute of Chemistry pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Technische Universität Berlin pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Manitoba pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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A N Bach Institute of Biochemistry pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Pirogov Russian National Research Medical University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Faculty of Biology pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Department of Photonics pays non établi dans la noticeInstitution
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Department of Chemistry pays non établi dans la noticeInstitution
Lomonosov Moscow State University, Faculty (United Kingdom) et Institute of Bioorganic Chemistry, avec 9 autres affiliations.
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