Validação de ensaio para avaliação plaquetária por citometria de fluxo

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Objetivo: O diagnóstico dos distúrbios plaquetários é desafiador devido à complexidade e à raridade das doenças, e à falta de métodos de fácil acesso aos laboratórios clínicos. A diminuição ou ausência de expressão das glicoproteínas GPIIIa (CD61) e GPIIb (CD41,) e GPIb (CD42b) e GPIX (CD42a) pode ser encontrada nas síndromes hemorrágicas, como a síndrome de Bernard-Soulier (SBS) e a trombastenia de Glanzmann (GT). O objetivo deste estudo foi descrever a validação da análise de citometria plaquetária utilizando amostras normais coletadas em tubos com anticoagulantes EDTA e citrato de sódio. Método: Foram analisadas 10 amostras de doadores saudáveis coletadas em tubos de EDTA e citrato de sódio e processadas em 24 horas. Para amostra de EDTA foi utilizada uma diluição de 5uL de sangue total em 45uL de tampão PBS, e para o citrato de sódio, foi preparado um plasma rico em plaquetas. As amostras foram incubadas com anticorpos monoclonais seguindo a combinação: Tubo 1: CD41a FITC e CD42b APC; Tubo 2: CD61 FITC e CD42aV450 e a aquisição realizada no equipamento FACS CANTO II (500 mil a 1 milhão de eventos no gate plaquetário). A análise foi realizada no software Infinicyt e a expressão antigênica dos marcadores foi avaliada nas plaquetas normais com resultado esperado de positivo(+); os dados foram comparados. Conclusão: Ambas as técnicas com EDTA e citrato de sódio apresentaram resultados satisfatórios na expressão antigênica dos marcadores expressos em plaquetas. Devido à escassez de amostra patológica, a validação do teste foi aprovada em amostras normais até que a amostra patológica seja selecionada. Após a comparação dos resultados, optou-se por implementar o teste em citrato de sódio, pois as estratégias de gate foram consideradas melhores devido à ausência de interferência de outras células para estudar a população de interesse. Para o laboratório clínico que tem citometria de fluxo, esse exame é simples, confiável e auxilia no diagnóstico de síndromes hemorrágicas raras.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.