Tagless LysoIP for immunoaffinity enrichment of native lysosomes from clinical samples
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Le résumé fourni par la source
Lysosomes are implicated in a wide spectrum of human diseases, including monogenic lysosomal storage disorders (LSDs), age-associated neurodegeneration, and cancer. Profiling lysosomal content using tag-based lysosomal immunoprecipitation (LysoTagIP) in cell and animal models has substantially moved the field forward, but studying lysosomal dysfunction in patients remains challenging. Here, we report the development of the 'tagless LysoIP' method, designed to enable the rapid enrichment of lysosomes, via immunoprecipitation, using the endogenous integral lysosomal membrane protein TMEM192, directly from clinical samples and human cell lines (e.g., induced pluripotent stem cell-derived neurons). Isolated lysosomes were intact and suitable for subsequent multimodal omics analyses. To validate our approach, we applied the tagless LysoIP to enrich lysosomes from peripheral blood mononuclear cells derived from fresh blood of healthy donors and patients with CLN3 disease, an autosomal recessive neurodegenerative LSD. Metabolic profiling of isolated lysosomes revealed massive accumulation of glycerophosphodiesters (GPDs) in patients' lysosomes. Interestingly, a patient with a milder phenotype and genotype displayed lower accumulation of lysosomal GPDs, consistent with their potential role as disease biomarkers. Altogether, the tagless LysoIP provides a framework to study native lysosomes from patient samples, identify disease biomarkers, and discover human-relevant disease mechanisms.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Tagless LysoIP for immunoaffinity enrichment of native lysosomes from clinical samples
- Date Crossref
- 26/12/2024
- Éditeur
- American Society for Clinical Investigation
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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University of Dundee pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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MRC Protein Phosphorylation and Ubiquitylation Unit pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Research Network (United States) pays non établi dans la noticeEntreprise
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Medical Research Council pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Stanford University The Institute for Chemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Universitätsklinikum Erlangen pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Utrecht University pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University Medical Center Utrecht Department of Metabolic diseases pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Wilhelmina Children's Hospital pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Universität Hamburg pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University Medical Center Hamburg-Eppendorf Department of Pediatrics pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
University of Dundee, MRC Protein Phosphorylation and Ubiquitylation Unit et Research Network (United States), avec 9 autres affiliations.
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