In-vitro-Infektionsmodell für HBV Genotyp E

Résumé fourni par la source

Einleitung: Der für Afrika prävalente HBV-Genotyp E (HBV-E) wird mit einer relativ hohen Virusreplikation und einem höheren Risiko für das Hepatozelluläre Karzinom (HCC) assoziiert. Obwohl diese Region eine überproportional hohe Hepatitis-B-Endemie aufweist, sind Studien zu diesem Genotyp noch immer unterrepräsentiert. Ziele: Ziel dieses Projektes ist es, ein in-vitro Infektionsmodell für den HBV-Genotyp E zu etablieren, um die Produktion von Biomarkern und die Pathogenese dieses Genotyps besser zu verstehen. Methodik: Replikationsfähige HBV-E-Plasmide, welche den HBV-E enthalten (1.5 und 1.1mer HBV-DNA-Konstrukte) wurden durch fast cloning (Li et al. 2011) generiert und zur anschließenden Virusproduktion in HepG2-hNTCP-Zellen transfiziert. Die gewonnenen HBV-E-Viruspartikel wurden mittels Gradientenkonzentration aufkonzentriert und anschließend auf ihre Infektiosität durch in-vitro Infektion in HepG2-hNTCP getestet. HBV-Biomarker, einschließlich HBV-DNA, HBV-RNA, HBeAg und HBsAg (sowie die HBsAg-Zusammensetzung) wurden während der Transfektions- und Infektionsexperimente bis zu 22 Tage lang überwacht. Ergebnis: Die Transfektion mit den generierten HBV-E Plasmiden in HepG2-hNTCP-Zellen führte zu einer erfolgreichen Produktion von HBV-DNA, HBV-RNA, HBeAg und HBsAg sowohl in 1.1mer als auch in 1.5mer, mit einer höheren Expression von HBeAg und HBsAg in 1.5mer. Verglichen zur HBV-Genotyp D-Kontrolle waren die HBsAg-Spiegel jedoch für beide Konstrukte, sowohl das 1.1mer HBV-E als auch das 1.5mer HBV-E niedriger (200 IU/mL vs. 5 IU/mL und 15 IU/mL). Die in-vitro- Infektion mit den erzeugten HBV-E-Viren führte nach 8 Tagen zu einer de-novo -Infektion, welche mittels Immunfluoreszenz des HBcAg gezeigt werden konnte. Die HBV-DNA- und HBV-RNA-Spiegel sanken vom Input (7,3 log 10 cp/mL und 4,8 log 10 cp/mL) bis zum Wash-out (3,9 log 10 cp/mL und -1log 10 cp/mL) und zeigten 10 Tage nach Infektion einen stabilen Anstieg auf 5,3 log 10 cp/mL und 3,2 log 10 cp/mL, gefolgt von einer anhaltenden Expression im Verlauf der Infektion. Schlussfolgerung: Die neu entwickelten HBV-E-Plasmide können in Zellkulturen transfiziert und zur Erzeugung infektiöser und stabil replizierender HBV-E-Viren für in-vitro -Analysen verwendet werden. Unser Modell kann für weitere Studien zur HBV-Replikation und zur Wirksamkeit von antiviralen Medikamenten im HBV-E verwendet werden. Publication History Article published online: 26 September 2024 © 2024. Thieme. All rights reserved. Georg Thieme Verlag KG Rüdigerstraße 14, 70469 Stuttgart, Germany

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.