A bead-based GPCR phosphorylation immunoassay for high-throughput ligand profiling and GRK inhibitor screening
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Le résumé fourni par la source
Analysis of agonist-driven phosphorylation of G protein-coupled receptors (GPCRs) can provide valuable insights into the receptor activation state and ligand pharmacology. However, to date, assessment of GPCR phosphorylation using high-throughput applications has been challenging. We have developed and validated a bead-based immunoassay for the quantitative assessment of agonist-induced GPCR phosphorylation that can be performed entirely in multiwell cell culture plates. The assay involves immunoprecipitation of affinity-tagged receptors using magnetic beads followed by protein detection using phosphorylation state-specific and phosphorylation state-independent anti-GPCR antibodies. As proof of concept, five prototypical GPCRs (MOP, C5a1, D1, SST2, CB2) were treated with different agonizts and antagonists, and concentration-response curves were generated. We then extended our approach to establish selective cellular GPCR kinase (GRK) inhibitor assays, which led to the rapid identification of a selective GRK5/6 inhibitor (LDC8988) and a highly potent pan-GRK inhibitor (LDC9728). In conclusion, this versatile GPCR phosphorylation assay can be used extensively for ligand profiling and inhibitor screening.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- A bead-based GPCR phosphorylation immunoassay for high-throughput ligand profiling and GRK inhibitor screening
- Date Crossref
- 09/11/2022
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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Jena University Hospital pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Friedrich Schiller University Jena pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Lead Discovery Center (Germany) pays non établi dans la noticeEntreprise
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Universität Innsbruck pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Würzburg pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Institut für Pharmakologie und Toxikologie pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institut für Molekulare Zellbiologie pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Lead Discovery Center GmbH pays non établi dans la noticeEntreprise
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University of Innsbruck Department of Pharmaceutical Chemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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University of Wuerzburg Center for Integrative and Translational Bioimaging pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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