Engineered helicase replaces thermocycler in DNA amplification while retaining desired PCR characteristics
Rattachement africain : us. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
Polymerase Chain Reaction (PCR) is an essential method in molecular diagnostics and life sciences. PCR requires thermal cycling for heating the DNA for strand separation and cooling it for replication. The process uses a specialized hardware and exposes biomolecules to temperatures above 95 °C. Here, we engineer a PcrA M6 helicase with enhanced speed and processivity to replace the heating step by enzymatic DNA unwinding while retaining desired PCR characteristics. We name this isothermal amplification method SHARP (SSB-Helicase Assisted Rapid PCR) because it uses the engineered helicase and single-stranded DNA binding protein (SSB) in addition to standard PCR reagents. SHARP can generate amplicons with lengths of up to 6000 base pairs. SHARP can produce functional DNA, a plasmid that imparts cells with antibiotic resistance, and can amplify specific fragments from genomic DNA of human cells. We further use SHARP to assess the outcome of CRISPR-Cas9 editing at endogenous genomic sites.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Engineered helicase replaces thermocycler in DNA amplification while retaining desired PCR characteristics
- Date Crossref
- 23/10/2022
- Éditeur
- Springer Science and Business Media LLC
- Type
- journal-article
Ce recoupement confirme des métadonnées liées au DOI. Il ne confirme ni la méthode ni les conclusions de l’étude, et il ne compte pas comme une seconde source scientifique indépendante.
Où se fait cette recherche
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Johns Hopkins University Department of Biophysics and Biophysical Chemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Johns Hopkins Medicine pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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University of California San Diego Department of Chemistry and Biochemistry pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Howard Hughes Medical Institute pays non établi dans la noticeStructure de recherche
Department of Biophysics and Biophysical Chemistry — Johns Hopkins University, Johns Hopkins Medicine et Department of Chemistry and Biochemistry — University of California San Diego, avec 1 autre affiliation.
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