Three Mutations Convert the Selectivity of a Protein Sensor from Nicotinic Agonists to S-Methadone for Use in Cells, Organelles, and Biofluids
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Le résumé fourni par la source
We report a reagentless, intensity-based S-methadone fluorescent sensor, iS-methadoneSnFR, consisting of a circularly permuted GFP inserted within the sequence of a mutated bacterial periplasmic binding protein (PBP). We evolved a previously reported nicotine-binding PBP to become a selective S-methadone-binding sensor, via three mutations in the PBP's second shell and hinge regions. iS-methadoneSnFR displays the necessary sensitivity, kinetics, and selectivity─notably enantioselectivity against R-methadone─for biological applications. Robust iS-methadoneSnFR responses in human sweat and saliva and mouse serum enable diagnostic uses. Expression and imaging in mammalian cells demonstrate that S-methadone enters at least two organelles and undergoes acid trapping in the Golgi apparatus, where opioid receptors can signal. This work shows a straightforward strategy in adapting existing PBPs to serve real-time applications ranging from subcellular to personal pharmacokinetics.
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Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Three Mutations Convert the Selectivity of a Protein Sensor from Nicotinic Agonists to S-Methadone for Use in Cells, Organelles, and Biofluids
- Date Crossref
- 21/04/2022
- Éditeur
- American Chemical Society (ACS)
- Type
- journal-article
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Où se fait cette recherche
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California Institute of Technology Division of Biology and Biological Engineering pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Howard Hughes Medical Institute pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Janelia Research Campus pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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University of California San Diego Howard Hughes Medical Institute pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Division of Biology and Biological Engineering — California Institute of Technology, Howard Hughes Medical Institute et Janelia Research Campus, avec 1 autre affiliation.
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