Improved fluorescent proteins for dual-color post-embedding CLEM
Rattachement africain : cn, dk. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
Abstract Post-embedding correlative light and electron microscopy (CLEM) has the advantage of high-precision registration and enables light and electron microscopy imaging of the same slice. However, its broad application has been hampered by the limited available fluorescent proteins (FPs) and low signal-to-background ratio (SBR). Here, we developed a green photoswitchable FP, mEosEM-E with substantially high on/off contrast in EM samples embedded in Epon resin which maximally preserves cellular structures but quenches the fluorescence of FPs. Taking advantage of the photoswitching property of mEosEM-E, the autofluorescence background from the resin was significantly reduced by a subtraction-based CLEM (sCLEM) method. Meanwhile, we identified a red fluorescent protein (RFP) mScharlet-H that exhibited higher brightness and SBR in resin than previously reported RFPs. With mEosEM-E and mScharlet-H, dual-color post-Epon-embedding CLEM images with high SBR and no cross-talk signal were successfully performed to reveal the organization of nucleolar proteins. Moreover, a dissection of the influences of different EM sample preparation steps on the fluorescence preservation for several RFPs provides useful guidance for further probe development.
Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.
Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Improved fluorescent proteins for dual-color post-embedding CLEM
- Date Crossref
- 16/02/2022
- Éditeur
- openRxiv
- Type
- posted-content
Ce recoupement confirme des métadonnées liées au DOI. Il ne confirme ni la méthode ni les conclusions de l’étude, et il ne compte pas comme une seconde source scientifique indépendante.
Où se fait cette recherche
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Chinese Academy of Sciences pays non établi dans la noticeOrganisme public
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Guangzhou Regenerative Medicine and Health Guangdong Laboratory pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Institute of Biophysics pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Aarhus University Dept of Clinical Medicine pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Sino-Danish Centre for Education and Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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University of Chinese Academy of Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Key Laboratory of RNA Biology pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Sino-Danish Center for Education and Research pays non établi dans la noticeInstitution
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Sino-Danish College pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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National Laboratory of Biomacromolecules pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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College of Life Sciences pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
Chinese Academy of Sciences, Guangzhou Regenerative Medicine and Health Guangdong Laboratory et Institute of Biophysics, avec 8 autres affiliations.
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