Novel contributions of cohesin and PDS5 to maintain genome stability during dna replication
Le résumé fourni par la source
El complejo de cohesina juega un papel esencial en la organizacion cromosomica y afecta asi a la mayor parte de los procesos nucleares. La asociacion de la cohesina con la cromatina es dinamica, una caracteristica que regula sus funciones y que viene determinada por la accion de varias proteinas que se asocian al complejo. PDS5 es una de ellas. En celulas de vertebrados, existen dos isoformas de PDS5, PDS5A y PDS5B, cuyas funciones especificas aun se desconocen. Para aclarar esta cuestion, hemos tratado de identificar proteinas que interaccionaran de forma exclusiva con PDS5A y PDS5B analizando los inmunoprecipitados obtenidos de extractos de celulas humanas con anticuerpos que reconocen una u otra isoforma mediante espectrometria de masas. Si bien nuestra aproximacion experimental no ha tenido exito, en el camino hemos encontrado que ambas isoformas de PDS5 interaccionan con proteinas que participan en la proteccion de horquillas de replicacion. Por ello, decidimos profundizar en resultados previos de nuestro grupo que apuntaban a la importancia de la asociacion dinamica de la cohesina con cromatina en el proceso de replicacion del ADN. Con este fin se generaron lineas celulares humanas deficientes para una o ambas proteinas PDS5. Mediante ensayos de molecula unica en fibras de ADN confirmamos que la eliminacion de las proteinas PDS5, o de otro factor denominado WAPL que tambien descarga la cohesina de la cromatina, impide el avance eficiente de la horquilla de replicacion. Estos defectos se rescatan al eliminar la cohesina. Tambien demostramos que PDS5 y cohesina son necesarias para proteger la integridad de las horquillas de replicacion que estan paradas, pues facilitan el reclutamiento a dichas horquillas de BRCA2, RAD51 y WRNIP1. Estas proteinas, a su vez, impiden la accion de la nucleasa MRE11. Tanto PDS5A como PDS5B, pueden descargar la cohesina de cromatina y reclutar a las proteinas que participan en la proteccion de las horquillas replicativas, de modo que solo se observan defectos en estos procesos en ausencia de ambas isoformas. En esta condicion, las celulas apenas proliferan y se observa acumulacion de dano en el ADN y mayor muerte celular. En conjunto, nuestros resultados ponen de manifiesto la importancia de cohesina y las proteinas PDS5 en la replicacion del ADN y en la proteccion de las horquillas de replicacion que tiene lugar en respuesta al estres replicativo.
Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.