Multiplex staining by sequential immunostaining and antibody removal on routine tissue sections
Rattachement africain : it, be. Niveau de preuve : code pays fourni par la source.
Le résumé fourni par la source
ABSTRACT Multiplexing (mplx), labeling for multiple immunostains the very same cell or tissue section in situ, has raised considerable interest. The methods proposed include the use of labelled primary antibodies, spectral separation of fluorochromes, bleaching of the fluorophores or chromogens, blocking of previous antibody layers, all in various combinations. The major obstacles to the diffusion of this technique are high costs in custom antibodies and instruments, low throughput, scarcity of specialized skills or facilities. We have validated a method based on common primary and secondary antibodies and diffusely available fluorescent image scanners. It entails rounds of four-color indirect immunofluorescence, image acquisition and removal (stripping) of the antibodies, before another stain is applied. The images are digitally registered and the autofluorescence is subtracted. Removal of antibodies is accomplished by disulphide cleavage and a detergent or by a chaotropic salt treatment, this latter followed by antigen refolding. More than thirty different antibody stains can be applied to one single section from routinely fixed and embedded tissue. This method requires a modest investment in hardware and materials and uses freeware image analysis software. Mplx on routine tissue sections is a high throughput tool for in situ characterization of neoplastic, reactive, inflammatory and normal cells.
Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.
Le contrôle bibliographique ouvert
DOI retrouvé dans Crossref DOI retrouvé ; titre concordant.
- Titre Crossref
- Multiplex staining by sequential immunostaining and antibody removal on routine tissue sections
- Date Crossref
- 11/06/2017
- Éditeur
- openRxiv
- Type
- posted-content
Ce recoupement confirme des métadonnées liées au DOI. Il ne confirme ni la méthode ni les conclusions de l’étude, et il ne compte pas comme une seconde source scientifique indépendante.
Où se fait cette recherche
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University of Milano-Bicocca pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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KU Leuven pays non établi dans la noticeUniversité ou école supérieure
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Ripamonti pays non établi dans la noticeEntreprise
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European Institute of Oncology Department of Experimental Oncology pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Azienda Socio Sanitaria Territoriale Lariana pays non établi dans la noticeÉtablissement de santé
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Dipartimento di Medicina e Chirurgia pays non établi dans la noticeInstitution
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Laboratory of Translational Cell and Tissue Research pays non établi dans la noticeStructure de recherche
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Department of Pathology pays non établi dans la noticeInstitution
University of Milano-Bicocca, KU Leuven et Ripamonti, avec 5 autres affiliations.
Une affiliation ne permet pas de déduire la nationalité d’un auteur.