Expressionanalyse des lymphangiogenen VEGF-Rezeptors 3 (VEGFR-3) in humanen Magenkarzinomen und Charakterisierung der molekularen Expressionskontrolle des VEGFR-3 Gens

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Hintergrund/Einleitung: Der Tyrosinkinaserezeptor VEGFR-3 vermittelt die Wirkungen der lymphangiogenen Faktoren VEGF-C und -D und ist für die Abläufe der lymphogenen Metastasierung von zentraler Bedeutung. Das Expressionsmuster von VEGFR-3 in Magenkarzinomen sowie die molekularen Grundlagen der VEGFR-3 Genexpression sind unklar. Zielsetzung: Charakterisierung der VEGFR-3-Expression in Magenkarzinomgeweben sowie Analyse der molekularen Expressionskontrolle des VEGFR-3 Gens. Material und Methoden: Die VEGFR-3 Expression wurde mittels Immunhistochemie (IHC) und in situ Hybridisierung in 23 Magenkarzinomen und Normalgeweben untersucht. Lymph- und Hämangioendothelien wurden durch IHC-Analyse der Marker LYVE-1, PROX-1 und CD146 diskriminiert. Ergänzend wurden primäre Endothelzellen (HUVECs) bzw. Endothelzelllinien (HMEC-1, EA.hy926) sowie Magenepithelzelllinien (AGS, KATOIII, MKN28, MKN45) bezüglich VEGFR-3 mRNA Expression durch Real-Time PCR analysiert. Nach Klonierung von 1 kb der 5'-flankierenden VEGFR-3 Genregion, mit zum Teil >80% G/C-Gehalt, wurden 5'-Deletionskonstrukte nach Transfektion in Endothelzellinien funktionell untersucht. Ergebnisse: In allen 23 untersuchten Magenkarzinomen fand sich eine deutliche Häm- und Lymphendothel-spezifische VEGFR-3 Expression, die auch durch in situ Hybridisierungen auf RNA-Ebene bestätigt wurde. Real-Time PCR-Assays identifizierten VEGF-R3-Expression ausschließlich in endothelialen Zellen HMEC-1, HUVEC und reduziert in EA.hy926, alle untersuchten Magenkarzinomzelllinien (AGS, KATOIII, MKN28, MKN45) waren negativ. Die funktionelle 5'-Deletionsanalyse identifizierte basale „Enhancer“-Elemente zwischen -198/-5, wobei die in silico Analyse dieser Region Bindungsstellen für Transkriptionsfaktoren wie Sp1, AP2, USF oder N-Myc identifizierte. Schlussfolgerung: Magenkarzinome exprimieren VEGFR-3 in Lymph- und Hämangioendothelien. Unsere in vitro-Analysen bestätigen diesen Befund und identifizieren den, für die VEGFR-3-Expression essentiellen, Promotorbereich. Die diagnostisch/prognostische Wertigkeit des VEGFR-3-Nachweises in Magenkarzinomen wird neben den molekularen Grundlagen der VEGFR-3-Expression in derzeit laufenden Studien untersucht, um neue diagnostische und/oder therapeutische Ansätze zur Behandlung des metastasierenden Magenkarzinoms zu entwickeln.

Ce résumé expose les affirmations des auteurs. BNTIC ne l’interprète pas comme une validation indépendante des résultats.