Isolation and Purification of Erythrocyte Catalase of Buffalo (Bubalus bubalis)

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Summary A procedure applicable to a large volume of erythrocytes was developed for the isolation and purification of catalase from buffalo erythrocytes. A purification factor of 1092-fold, with a 22.5% recovery, was achieved using gel filtration on Sephadex G-100 and ion exchange chromatography on DEAE-cellulose. The homogeneity of the preparation was checked electrophoretically on polyacrylamide gel and also by staining with 0-dianisidine and hydrogen peroxide. The absorption ratio (405/280 nm.) after gel filtration on Sephadex G-200 was 1.03, with a specific activity of 17.48. Zusammenfassung Isolierung und Reinigung der Erythrozyten-Katalase aus Büffelblut Zur Isolierung und Reinigung großer Mengen Erythrozytenkatalase aus Büffelblut wurde eine Methode entwickelt. Mittels Gelfiltration auf Sephadex G-100 und Ionen-Austauscher-Chromatographie auf DEAE-Zellulose wurde ein Reinigungsfaktor von 1092 sowie eine 22,5% Ausbeute erreicht. Die Homogenität des Präparates wurde elektrophoretisch auf Polyacrylamidgel und Färbung mittels 0-Dianisidin und Wasserstoffperoxid geprüft. Das Absorptionsverhältnis (405/280 nm.) nach der Gelfiltration auf Sephadex G-200 betrug 1,03 bei einer spezifischen Aktivität von 17,48. Résumé Isolement et purification de la catalase érythrocytaire du sang de buffle On a développé une méthode pour l'isolement et la purification de grandes quantités de catalase érythrocytaire à partir du sang de buffle. On a atteint un facteur de purification de 1092 et un rendement de 22,5% avec une filtration sur gélose Sephadex G-100 et une chromatographie par échangeur d'ions sur DEAE-cellulose. L'homogénéité de la préparation a été testée électrophorétiquement sur gel de polyacrylamide et la coloration exécutée avec 0-dianisidine et eau oxygénée. Le rapport d'absorption (405/280 nm.) après filtration sur gélose Sephadex G-200 a donné 1,03 avec une activité spécifique de 17,48. Resumen Aislamiento y purificación de la catalasa eritrocitaria de búfalo (Bubalus bubalis) Se desarrolló un método para el aislamiento y la purificación de cantidades grandes de catalasa eritrocitaria a partir de sangre de búfalo. Se logró un factor de purificación de 1.092 y un rendimiento de 22,5% con la filtración sobre gelosa Sephadex G-100 y la cromatografía por cambiador de iones sobre DEAE-celulosa. La homogeneidad de la preparación se comprobó electroforéticamente sobre gel de poliacrilamida y la coloración ejecutada con 0-dianisidina y agua oxigenada. La relación de absorción (405/280 nm.) tras filtración sobre gelosa Sephadex G-200 importó 1,03 con una actividad específica de 17,48.

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